冷静理智的法政部高级化验师高彦博（欧阳震华 饰），洞察力过人的他单凭一条头发、衣物纤维便能协助警方破案。但他没有想到的是，妻子的弟弟、身为法医的古泽琛（林文龙 饰）和高级督察梁小柔（蒙嘉慧 饰），都怀疑彦博毒害了自己的妻子。 彦博只好用自己的学习的专业知识证明自己的清白。后来彦博、泽琛、小柔三人都成为了各自领域的精英，一起携手合作揭破了一宗又一宗迷离案件，但谜团还是不断出现，甚至威胁到了他们的生命危险……
在院长杨逸滔和副院长唐明的领导下，明成北医院的急症室、心胸肺科、神经外科三个核心部门，每天都谱写着拯救生命的医患故事。滔志不止于拯救病患，他希望推动全面开放药物名册，务求让香港不再有人因为买不起药而等死。滔的远大理想却受到肿瘤科专家叶晴的质疑，晴空降到明成北出任院长，跟滔分庭抗礼。另一方面，晴被明的人格魅力和精湛医术所折服，但明却只在乎未婚妻苏怡…… 与此同时，具备急症室和普通外科双专业资格的李文信从无国界医生退役，加入明成北急症室。信擅长处理种种奇难杂症，深得滔的器重，但信竟是滔女友吕蔼宁的前度男友…… 这群有血有肉的医生在感情路上相知相遇，在医疗政策改革中针锋相对，但始终秉持着医者的仁心，歌颂生命的价值和意义，发挥人文关爱精神。
金蛇郎君夏雪宜（江华 饰）全家被温家堡恶人所杀，前往温家寻仇的过程中与温家小姐温仪（吴美珩 饰）相爱结合生下女儿青青，却无奈温家几老利用温仪使夏雪宜重伤，温仪亦被推入井中活埋。成年后的青青（欧子欣 饰）蛮横凶恶，巧遇了袁崇焕之子袁承志（林家栋 饰），日久生情，但是袁承志却钟情于救下的弱女子阿九（佘诗曼 饰）。袁承志此时已经是金蛇郎君的徒弟，誓报父仇，金蛇郎君与五毒教妖女何红药（关宝慧 饰）之间恩怨纠缠，牵扯到了若干人等，而阿九的真正身份居然是明朝公主，李自成起义、清兵入关，国仇家恨爱恨情仇，袁承志该如何抉择？
又是新一届投靠谈判专家的时候，无心插柳的杨光（张智霖 饰）与有心栽花的叶可人（文颂娴 饰）也在这支大军中。他们的老师分别是警界明星彭国栋（欧阳震华 饰）和女强人简洁（郭可盈 饰）。杨光表面上是富家子弟，实际生母在家中并无地位，于是形成了他得过且过，开心就好的性格。这种性格深被为人自负的彭国栋所反感，培训过程中摩擦不断。然而胆子很小的可人则因为害怕国栋影响了正常的发挥。简洁平日专注工作，没有时间陪伴丈夫家聪（陈豪 饰），不料到同样寂寞的国栋的妻子与家聪发生了婚外情。对丈夫一往情深的简洁不能接受这样的局面，提出离婚。无奈离婚后方发现自己怀孕。而同样离婚结局的国栋在一次工作中受伤，从此只能靠轮椅代步。这些事情均改变了二人原本的性格缺憾，他们渐渐走近。
擁有識破謊言能力的陸芊雨，卻一直受盡此能力困擾，無法相信別人，後來發現可把這能力變成賺錢工具，替人辯識謊言解困，成為謊言捕手。自遇上天才作曲家文祖和後，卻從未聽到他說過一句謊言，一度懷疑自己的能力失效。芊雨不斷找方法接近祖和以測試自己的能力，過程中卻發現祖和不止是五年前她曾意外幫助過的陌生男生，更是一宗少女失蹤謀殺案的嫌疑犯。祖和因被懷疑謀殺案受盡唾罵，多年來，一直隱姓埋名，更從不露面過著隱居生活，唯遇上芊雨後，芊雨不但成為唯一相信他的人，更協助他尋找真相。過程中，二人慢慢靠近，發展出超凡情誼，更互相解開心結，芊雨逐漸開始對人產生信心，而祖和也再次投入正常生活。
人心，是一门深奥的科学。人会犯罪作恶，皆因被贪婪、愤怒、软弱和嫉妒等情绪支配。为了逃避刑责，人会利用谎言掩饰真相，用诡计扰乱视线，令法证工作难上加难。未破的悬案、消失的证据、迷失的困局，都是法证团队面对的一个个难关。纵然过程中会受到打击，但他们都会坚持初心，跌倒之后重新出发，不会放弃追寻真相。 《法证先锋V》的案件和布局更加让人意想不到，唯有靠着“法证部”、“法医科”及“重案组”这灭罪铁三角，秉承前四季的理念，通力合作，找出真凶，还生者公道，替死者雪冤。
影片由四个带有旧港气息的都市故事组成，分别以伪盲女智斗杀手、狗仔缉凶、黑帮角斗以及职场女性被上司迫害为切口，借黑帮、狗仔文化、霓虹街巷的罪恶等上世纪香港特有社会产物，展现九十年代香港的江湖秩序、娱乐浮华、都市危机与小人物生存百态，构成一幅充满悬疑与时代感的旧港浮世绘。
「光明大押」是間屹立小區數十載的老字號當鋪。駐店二叔 公集百家辨別真偽絕學於一身，什麼刁鑽假金偽鑽，均難逃 他的法眼，關家各人都叫他堅叔 (謝君豪 飾)，雖無血緣關係， 但堅叔和關家各人猶如至親。關家父母早逝，堅叔如管家般 照料姊弟關聆和關俊二人成長，三人關係親密。不幸地，三人關係卻因一事而改變，之後更分開居住。 但時日如飛，當鋪生意一落千丈，面臨財務崩潰的邊緣。這時，關聆和關俊再次出現，究竟他們的忽然出現，是敵是友， 是禍是福，三人會擦出怎樣的火花⋯⋯
在香港，一个人失踪七年，其家属可申请该人在法律上死亡。正当制作公司老板杨万森（马德钟饰）决定放下失踪七年的妻子顾晴天（黄智雯饰），和一直扶持自己的红颜知己朱善美（张曦雯饰）举行婚礼之际，儿子志骞的生母晴天竟现身眼前！晴天因意外墮崖失忆流落外地，在律师金长胜（罗天宇饰）帮助下，七年后重返香港，打算寻回过往记忆。晴天重操故业当上记者，竟查出当年自己的失踪似是有人加害……另边厢，万森面对新欢、旧爱两难全，更怕晴天回复记忆，让事情变得一发不可收拾……
