《亲子鉴定师手记》讲述了以董宁书为代表的青年亲子鉴定师们，面对一个个来进行亲子鉴定的家庭，在一个个充满狗血的案例中破译温情，在小小的亲子鉴定所中上演着无数围绕亲子真相的修罗场，而这群年轻人也在这些案例中找到自己的人生方向，在最残酷的真相中，做出最人性的抉择。
象牙山村的故事继续上演：谢兰和皮长生喜得贵子，美坏了外公谢广坤（唐鉴军 饰），整天抱着孩子招摇过市，这便急煞了刘能（王小利 饰）和赵四（刘小光 饰）。为早日实现传宗接代的大业，赵四将玉田（吴云飞 饰）和刘英（蒋依杉 饰）关在屋里，一门心思造人；广坤得意的同时，又给永强（贺树峰 饰）和小蒙（毕畅 饰）施加压力，逼他们早日要孩子，结果是纷争连连，也让相爱的两人心生离析；长贵（王小宝 饰）事业一帆风顺，升任水利站站长，由此变得有些飘飘然，开始想尽一切办法大拍齐镇长马屁，反而弄巧成拙。 此外，王天来（小沈阳 饰）、王大拿（赵本山 饰）、刘大脑袋（刘流 饰）、刘一水……各自有着各自的故事，有着各自的喜怒哀乐……
张珍（关智斌 饰）优美的笛声吸引了海里的鲤鱼精红绫（赵丽颖 饰），借为龙王选寿礼之机，她来到令人惊奇的人间，巧遇曾有过一面之缘的张珍。张父文祥（程泓 饰）与宰相之妹金若兰（白珊 饰）相爱多年，红绫与张珍有意撮合这一对有情人，不料大婚前夕张文洋遭坏人毒手，侍卫展风（丁子峻 饰）协张珍追查杀父仇人，暗恋张珍的玩伴唐心（曹馨月 饰）一同跟随调查。宰相金宠之女金牡丹（戴娇倩 饰）自幼指腹为婚许配张珍，怎奈牡丹心高气傲，一心想要嫁入皇门，根本瞧不上穷酸书生张珍。目睹此景，红绫摇身一变化作牡丹人身，与张珍谈情说爱，谁知日久生情，陷入真爱无法自拔。一心攀高枝的金牡丹做梦都没想到，京城四品侍卫展风竟是自己朝思暮想的太子赵端......
